Banner

VZV REAL-TIME PCR

(Cập nhật: 27/11/2017)

VZV REAL-TIME PCR

I. MỤC ĐÍCH VÀ NGUYÊN LÝ

1. Mục đích

Xác định sự có mặt gen đặc trưng của Varicella zoster virus (VZV) trong dịch não tủy, dịch vết loét hoặc mảnh sinh thiết ở người.

2. Nguyên lý

Xác định gen đặc trưng của Varicella zoster virus (VZV) dựa trên nguyên lý của kỹ thuật real-time PCR.

II. CHUẨN BỊ

1. Người thực hiện

- Người thực hiện: Cán bộ xét nghiệm đã được đào tạo và có chứng chỉ hoặc chứng nhận về chuyên ngành Vi sinh.

- Người nhận định và phê duyệt kết quả: Trưởng khoa, phó khoa, Cán bộ có trình độ đại học trở lên

- Cán bộ quản lý chất lượng, tổ trưởng chuyên môn chịu trách nhiệm giám sát việc tuân thủ quy trình

2. Phương tiện, hóa chất

Phương tiện, hóa chất như ví dụ dưới đây hoặc tương đương.

2.1 Trang thiết bị

-  Máy real-time PCR và hệ thống máy vi tính.

-  Bộ lưu điện

-  Máy ủ nhiệt

-  Máy ly tâm dùng cho tube 0,2ml

-  Máy ly tâm 25000 x g

-  Máy vortex

-  Tủ an toàn sinh học cấp 2

-  Tủ lạnh 20C - 80C

-  Tủ âm sâu (- 200C hoặc -700C)

-  Micropipette các thể tích từ 5 l - 1000 l.

2.2 Dụng cụ, hóa chất và vật tư tiêu hao (bao gồm nội kiểm, ngoại kiểm)

Thực hiện xét nghiệm 02 mẫu/lần

STT

Chi phí hóa chất, vật tư tiêu hao

Đơn vị

Số lượng

1

Tăm bông vô trùng

Cái

1,000

2

Tube đựng bệnh phẩm vô trùng

Cái

1,000

3

Găng không có bột tal

Đôi

0,100

4

Khay đựng bệnh phẩm

Cái

0,0001

5

Hộp vận chuyển bệnh phẩm

Cái

0,001

6

Sinh phẩm chẩn đoán

Test

1,000

7

Khấu  hao  sinh  phẩm  cho  chạy  chứng,

Test

1,200

 

kiểm tra chất lượng

 

 

8

Kit tách DNA

Test

2,200

9

Ngoại kiểm (nếu có)*

 

0,020

10

ống Falcol 50 ml

Cái

0,010

11

Eppendorf 1,7 ml

Tube

2,200

12

Eppendorf 0,2 ml

Tube

2,200

13

Đầu côn 10 µl có lọc

Cái

2,200

14

Đầu côn 30 µl

Cái

1,200

15

Đầu côn 200 µl có lọc

Cái

5,200

16

Đầu côn 1 ml có lọc

Cái

3,200

17

Water-DEPC Treated

ml

1,000

18

Giấy thấm

Cuộn

0,100

19

Giấy xét nghiệm

Tờ

2,000

20

Sổ lưu kết quả xét nghiệm

Tờ

0,001

21

Bút viết kính

Cái

0,020

22

Bút bi

Cái

0,010

23

Cái

0,020

24

Khẩu trang

Cái

0,020

25

Găng tay không bột tal

Đôi

0,100

26

Găng tay xử lý dụng cụ

Đôi

0,020

27

Quần áo bảo hộ

Bộ

0,005

28

Dung dịch nước rửa tay

ml

8,000

29

Cồn sát trùng tay nhanh

ml

1,000

30

Dung dịch khử trùng

ml

10,000

31

Khăn lau tay

Cái

0,010

         

* Ghi chú: Chi phí ngoại kiểm cho quy trình kỹ thuật được tính cụ thể theo Chương trình ngoại kiểm (EQAS) là 1/50 tổng chi phí dụng cụ, hóa chất, vậttư tiêu hao (với số lần ngoại kiểm trung bình 2 lần/1 năm).

3. Bệnh phẩm

Dịch não tủy, dịch vết loét hoặc mảnh sinh thiết ...

4. Phiếu xét nghiệm

Điền đầy đủ thông tin theo mẫu yêu cầu

III. CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH

Các bước tiến hành thực hiện theo phương tiện, hóa chất được ví dụ ở trên.

1. Lấy bệnh phẩm

Theo đúng quy định của chuyên ngành Vi sinh:

Từ chối những bệnh phẩm không đạt yêu cầu:

2. Tiến hành kỹ thuật

Bộ sinh phẩm Real-time PCR định tính Varicella zoster virus (VD)

2.1. Tách chiết DNA

Có thể dùng kit tách chiết DNA bằng hoá chất phenol/chloroform hoặc tách chiết bằng cột của các nhà sản xuất khác như Qiagen, Stratec,

Roche...

2.2. Thực hiện phản ứng real-time PCR

-  Thực hiện bước này với các tube PCR mix được giữ trong khay lạnh hoặc đá đang tan.

-  Chỉ lấy đủ số tube PCR mix cần. Trước và sau khi đặt phản ứng PCR phải ly tâm tube để tất cả dung dịch nằm dước đáy tube.

-  Cho chứng +, chứng - hoặc dịch DNA tách chiết vào từng tube VZV rPCR Mix. Xong, đặt các tube vào máy real-time PCR.

-  Khởi động máy real-time PCR. Khởi động máy tính và chương trình real-time PCR.

-  Cài đặt vị trí mẫu “Plate setup” trên phần mềm đúng với vị trí mẫu đã đặt trên máy real-time PCR.

-  Chọn màu “CY5” và “HEX” cho mẫu, chứng dương và chứng âm.

-  Cài đặt chương trình “Protocol” cho máy real-time PCR hoạt động

-  Lưu file dữ liệu vào máy tính

-  Cho máy real-time PCR chạy chương trình.

IV. NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ

1. Điều kiện của phản ứng

-  Chứng dương có đường biểu diễn tín hiệu huỳnh quang màu CY5 dương tính và đường biểu diễn tín hiệu huỳnh quang màu HEX dương tính hoặc

-  âm tính.

-  Chứng âm có đường biểu diễn tín hiệu huỳnh quang màu CY5 âm tính và đường biểu diễn tín hiệu huỳnh quang màu HEX dương tính

2. Phân tích mẫu

-  Những mẫu dương tính chỉ cần chọn màu CY5 để phân tích, không cần quan tâm đến chứng nội, chứng nội có thể dương hoặc âm.

-  Những mẫu âm tính, chứng nội phải dương tính thì mới kết luận mẫu âm tính thật sự.

3. In đồ thị kết quả

V. NHỮNG SAI SÓT VÀ XỬ TRÍ

Có mẫu và chứng nội cũng đều âm tính. Chứng bình thường, có mẫu dương, mẫu âm thật sự.

1. Nguyên nhân

Có thể mẫu âm thực sự, có thể phản ứng PCR bị ức chế.

2. Khắc phục

-  Pha loãng mẫu từ 10-100 lần, thực hiện lại toàn bộ thí nghiệm từ bước tách chiết. Sau khi có kết quả phải nhân thêm với hệ số pha loãng mẫu. Nếu vẫn gặp sự cố trên, lấy lại mẫu theo đúng yêu cầu.

-  Trừ những mẫu sự cố, tất cả các mẫu bình thường đều có thể lấy kết quả.

 

(Lượt đọc: 1007)

Tin tức liên quan

  • Cấp cứu 115
  • Đường dây nóng
  • Khuyến cáo phòng chống bệnh viêm phổi cấp do vi rút Corona
  • Học tập làm theo lời bác
  • Chương trình mục tiêu quốc gia
  • Đại hội đảng
  • Lịch công tác
  • Hình ảnh hoạt động
  • Câu lạc bộ Tim mạch
  • Câu lạc bộ Tiểu đường
  • Câu lạc bộ Hen - COPD
  • Liên kết web
    • Bộ Y Tế
    • Báo Quảng Ninh
    • Sở Y tế Quảng Ninh
    • Báo cáo hoạt động khám chữa bệnh
    • Bệnh viện Bãi Cháy
    • Bệnh viện Sản nhi Quảng Ninh
    • CDC
    • Chi cục An toàn vệ sinh thực phẩm
    • Bệnh viện Cẩm phả
    • Bệnh viện Đa khoa khuc vực Cẩm phả
    • Bệnh viện Lao và phổi
    • Bệnh viện Phục hồi chức năng Quảng Ninh
    • Bệnh viện Việt Nam Thụy Điển Uông Bí
    • Bệnh viện Y dược cổ truyền Quảng Ninh
    • Trung tâm y tế Hạ Long
    • Trung tâm Y tế huyện Ba Chẽ
    • Trung tâm Y tế huyện Bình Liêu
    • Trung tâm Y tế huyện Đầm Hà
    • Trung tâm Y tế huyện Hải Hà
    • Trung tâm Y tế huyện Hoành Bồ
    • Trung tâm Y tế huyện Tiên Yên
    • Trung tâm Y tế huyện Vân Đồn
    • Trung tâm Y tế Thành phố Cẩm Phả
    • Trung tâm Y tế Thành phố Móng Cái
    • Trung tâm Y tế Thành phố Uông Bí
    • Trung tâm Y tế thị xã Đông Triều
    • Trung tâm Y tế thị xã Quảng Yên
    • Bệnh viện 108
    • Trung tâm DI & ADR quốc gia
    • Bệnh viện Bạch Mai
    • Bệnh viện Đa khoa tỉnh Phú Thọ
    • Bệnh viện Việt Đức
    • Sở Y tế tỉnh Phú Thọ