VS.QTKT.SHPT.21 QUY TRINH TÁCH CHIẾT DNA RNA THỦ CÔNG
(Cập nhật: 6/7/2020)
VS.QTKT.SHPT.21 QUY TRINH TÁCH CHIẾT DNA RNA THỦ CÔNG
I. MỤC ĐÍCH
Quy định thống nhất cách thức triển khai các bước tách chiết DNA/RNA tự động, nhằm đảm bảo độ tinh sạch và độ thu hồi DNA/RNA mẫu bệnh phẩm trước khi tiến hành phản ứng real-time PCR.
II. PHẠM VI ÁP DỤNG
Áp dụng tại Khoa xét nghiệm Vi sinh - Bệnh viện đa khoa Tỉnh Quảng Ninh.
III. TÀI LIỆU VIỆN DẪN
- Quyết định 26/QĐ-BYT ban hành ngày 03/01/2013 về việc ban hành tài liệu “Hướng dẫn quy trình kỹ thuật chuyên ngành Vi sinh Y học”
- Bộ Y tế, Giáo trình thực hành Vi sinh vật, NXB Y học, 2004.
IV. TRÁCH NHIỆM
- Người thực hiện: Cán bộ xét nghiệm đã được đào tạo và có chứng chỉ hoặc chứng nhận về chuyên ngành Vi sinh.
- Người nhận định và phê duyệt kết quả: Cán bộ xét nghiệm có trình độ đại học hoặc sau đại học về chuyên ngành Vi sinh.
- Cán bộ QLCL, tổ trưởng chuyên môn chịu trách nhiệm giám sát việc tuân thủ quy trình
V. ĐỊNH NGHĨA, THUẬT NGỮ, CHỮ VIẾT TẮT
RT – PCR |
Real Time Polymerase Chain Reaction |
DNA |
Deoxyribose Nucleic Acid |
BP |
Bệnh Phẩm |
IC |
Internal Control |
RT – PCR |
Real Time Polymerase Chain Reaction |
VI. TRANG THIẾT BỊ VÀ VẬT TƯ
6.1. Trang thiết bị
- Máy ly tâm Centrifuge 5424R (Eppendorf)
- Máy ly tâm MF 80 ( Hanil)
- Tủ lạnh 2°C - 8°C
- Tủ âm sâu (-20°C)
- Tủ an toàn sinh học cấp 2
- Tủ an toàn sinh học Esco PCR Cabinet
- Máy vortex
- Micropipettes 10µl, 100 µl, 1000 µl
- Máy ly tâm lắng mẫu nhanh cho tuve 0,2ml
- Máy tách chiết DNA – RNA tự động SaMag 12 – Sacase Biotechnology
- Máy SaCycler – 96 Real Time PCR System - Sacase Biotechnology
- Bộ lưu điện
6.2. Dụng cụ hóa chất, vật tư tiêu hao
- SaMag Viral Nucleic Acid Extraction Kit
- Kít định lượng virus HBV Real-TM (HBV Real-TM Quant Dx): Đạt tiêu chuẩn ISO 9001:2008 & 13485:2012.
- Khay đựng bệnh phẩm
- Hộp vận chuyển bệnh phẩm
- Tube đựng bệnh phẩm 15ml, 50ml
- Đầu côn có lọc 10µl , 100 µl, 1000 µl
- Effendorf loại 1,5 ml vô trùng
- Giấy thấm
- Giấy xét nghiệm
- Sổ lưu kết quả xét nghiệm
- Bút viết kính
- Bút bi
- Mũ
- Khẩu trang
- Găng không có bột
- Găng tay xử lý dụng cụ
- Quần áo bảo hộ
- Dung dịch nước rửa tay
- Cồn sát trùng tay nhanh
- Dung dịch khử trùng
- Khăn lau tay
- Dụng cụ để làm lạnh và giữ ống PCR
6.3. Mẫu bệnh phẩm
- Lấy mẫu bệnh phẩm theo đúng quy định của chuyên ngành Vi sinh.
- Từ chối những bệnh phẩm không đạt yêu cầu.
VII. NỘI DUNG
7.1. Chuẩn bị hóa chất và mẫu
+ Hóa chất tách chiết được đánh dấu theo thứ tự các bước 1-5 và để ở nhiệt độ phòng 15 phút, đảm bảo các hóa chất tan hoàn toàn trước khi sử dụng
+ Chuẩn bị các bệnh phẩm và đánh số thứ tự mẫu trên nắp và thành eppendorf.
7.2. Tách chiết DNA/RNA
BƯỚC 1:
- Cho 300 µl dung dịch lysis solution vào các ống đã đánh dấu
- Cho 100 µl bệnh phẩm, Vortex đều làm tan bệnh phẩm.
- Ủ ở 65°C trong vòng 5 phút
- Spin 10 sec nhằm lắng dung dịch ngưng tụ trên nắp ống xuống, tránh tạo khí dung khi mở nắp ống
BƯỚC 2:
- Cho 400 µl dung dịch prec sol vào ống đựng bệnh phẩm
- Trộn đều bằng đảo nhẹ ống eppendorf (inverse) tránh lắc và Vortex
- Ly tâm 13000 vòng/phút trong 5 phút, sẽ có cặn là xác tế bào màu xám nằm ở đáy ống
- Loại dung dịch phía trên và thu cặn
BƯỚC 3:
- Cho 500 µl dung dịch Washing solution 3
- Trộn đều tương tự bước 2
- Ly tâm 13000 vòng/phút trong 1 phút
- Loại dung dịch phía trên và thu cặn
BƯỚC 4:
- Cho 200 µl dung dịch Washing solution 4
- Trộn đều tương tự bước 2
- Ly tâm 13000 vòng/phút trong 1 phút
- Dùng pipette hút dung dịch phía trên và thu cặn
BƯỚC 5:
- Làm khô ở 65°C trong vòng 10 – 15 phút để cặn khô hoàn toàn
- Bổ sung 50 - 100 µl dung dịch Re – buffer
- Ủ ở 65° trong 5 phút.
- Ly tâm 13000 vòng/phút trong 1 phút trước khi sử dụng dịch DNA/RNA
VIII. HỒ SƠ LƯU
- Lưu trữ các biểu mẫu phiếu QC theo đúng quy định của khoa.
IX. TÀI LIỆU LIÊN QUAN
Tên tài liệu |
Mã tài liệu |
Quy trình thu thập và xử lý mẫu bệnh phẩm |
|
Sổ tay hướng dẫn lấy mẫu bệnh phẩm |
|
Quy trình an toàn phòng xét nghiệm |
|
(Lượt đọc: 6036)
Tin tức liên quan
- VS.QTKT.SHPT.20 QUY TRÌNH TÁCH CHIẾT DNA RNA TỰ ĐỘNG
- VS.QTKT.SHPT.19 REALTIME PCR ĐỊNH LƯỢNG CMV BẰNG HỆ THỐNG TỰ ĐỘNG
- VS.QTKT.SHPT.18 QUY TRÌNH XÁC ĐỊNH HBV KHÁNG THUỐC
- VS.QTKT.SHPT.17 REALTIME PCR XÁC ĐỊNH RICKETTSIA
- VS.QTKT.SHPT.16 REALTIME PCR XÁC ĐỊNH HELICOBACTER PYLORI
- VS.QTKT.SHPT.15 REALTIME PCR XÁC ĐỊNH Neisseria miningitides
- VS.QTKT.SHPT.14 REALTIME PCR XÁC ĐỊNH MYCOPLASMA PNEUMONIAE
- VS.QTKT.SHPT.13 REALTIME PCR XÁC ĐỊNH EV 71
- VS.QTKT.SHPT.12 REALTIME PCR XÁC ĐỊNH RSV
- VS.QTKT.SHPT.11 REALTIME PCR XÁC ĐỊNH EBV
- Tiêu điểm
- Tin đọc nhiều